TLVN Biotech

Đổ môi trường là một bước quan trọng trong quy trình nuôi cấy mô tế bào thực vật. Dưới đây là hướng dẫn đổ môi trường nuôi cấy mô chi tiết các bước thực hiện:

1. Chuẩn bị môi trường nuôi cấy:

• Pha chế môi trường:
  • Sử dụng các hóa chất và nguyên liệu theo công thức môi trường nuôi cấy đã chọn (ví dụ: môi trường MS, B5,…).
  • Cân chính xác các thành phần và hòa tan vào nước cất.
  • Điều chỉnh pH môi trường về khoảng 5.6-5.8.
  • Bổ sung chất làm đông (agar) với nồng độ thích hợp (thường 0.7-1%).
  • Đun nóng môi trường để agar tan hoàn toàn.
• Khử trùng môi trường:
  • Đổ môi trường vào các bình hoặc ống nghiệm chịu nhiệt.
  • Đậy kín nắp và hấp khử trùng ở 121°C trong 15-20 phút.

2. Chuẩn bị phòng cấy và dụng cụ:

• Phòng cấy:
  • Phòng cấy phải được vệ sinh sạch sẽ và khử trùng bằng tia UV hoặc hóa chất.
  • Tủ cấy vô trùng là nơi thực hiện thao tác đổ môi trường.
• Dụng cụ:
  • Bình hoặc ống nghiệm đã khử trùng.
  • Đèn cồn hoặc bếp cồn.
  • Kẹp hoặc pipet vô trùng.

3. Tiến hành đổ môi trường:

• Trong tủ cấy vô trùng:
  • Bật đèn UV của tủ cấy trong 15-20 phút trước khi thao tác.
  • Bật quạt gió của tủ cấy và làm sạch bề mặt làm việc bằng cồn 70%.
  • Đặt các bình hoặc ống nghiệm đã khử trùng vào tủ cấy.
  • Mở nắp bình môi trường đã hấp khử trùng.
  • Sử dụng pipet hoặc rót trực tiếp để đổ môi trường vào các bình hoặc ống nghiệm.
  • Đậy kín nắp ngay sau khi đổ.
  • Trong quá trình thao tác, cần giữ ngọn lửa đèn cồn gần khu vực làm việc để tạo môi trường vô trùng.
• Để nguội và đông đặc môi trường:
  • Sau khi đổ xong, để các bình hoặc ống nghiệm ở nhiệt độ phòng cho đến khi môi trường đông đặc hoàn toàn.
  • Kiểm tra môi trường xem có bị nhiễm khuẩn hay không trước khi sử dụng.

Lưu ý quan trọng:

• Vô trùng: Đảm bảo tất cả các bước đều được thực hiện trong điều kiện vô trùng để tránh nhiễm khuẩn môi trường.
• An toàn: Sử dụng các dụng cụ bảo hộ cá nhân (găng tay, khẩu trang, kính bảo hộ) khi làm việc với hóa chất và môi trường nuôi cấy.
• Chính xác: Cân đong chính xác các thành phần môi trường và điều chỉnh pH đúng cách.
• Tuân thủ quy trình: Tuân thủ nghiêm ngặt quy trình đổ môi trường để đảm bảo chất lượng môi trường nuôi cấy.
• Môi trường: tùy thuộc vào loại cây và mục đích nuôi cấy mà ta sẽ sử dụng các loại môi trường khác nhau.

Xem thêm: Thạch agar nuôi cấy mô